日韩av老熟女-久久播亚洲视频-国产精品久久久系列-日韩激情96久久-欧美亚洲熟女另类-久久人妻诱惑我-久久高清黄又色视频-日韩av中文字幕网站-日韩人妻精品中文字幕,日韩成人在线不卡av,国产精品一香蕉av,婷婷久久综合久久久

預(yù)存

登錄注冊

Document

當(dāng)前位置：文庫百科 ? 文章詳情

實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)中會出現(xiàn)的問題有哪些？

來源：測試GO 時(shí)間：2022-10-28 11:34:10 瀏覽：5110次

在科研人員進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn)操作中遇到了不計(jì)其數(shù)的問題，本文就給大家分享在實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)頻率最高的一些問題：

內(nèi)參基因COL1(擴(kuò)增曲線)

一、Ct值出現(xiàn)

檢測熒光信號的步驟有誤:一般SybrGreen法采用72℃延伸時(shí)采集，Taqman法則一般在退火結(jié)束時(shí)或延伸結(jié)束采集信號。

1、引物或探針降解:可通過PAGE電泳檢測其完整性。

2、模板量不足:對未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起。

3、模板降解:避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況。

二、Ct值出現(xiàn)過晚（Ct>38）

1、擴(kuò)增效率低:反應(yīng)條件不夠優(yōu)化。設(shè)計(jì)更好的引物或探針；改用三步法進(jìn)行反應(yīng)；適當(dāng)降低退火溫度；增加鎂離子濃度等。

2、PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足。

3、PCR產(chǎn)物太長:一般采用80-150bp的產(chǎn)物長度。

三、溶解曲線不止一個(gè)主峰

1、引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化：應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。

2、引物濃度不佳：適當(dāng)降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。

3、鎂離子濃度過高：適當(dāng)降低鎂離子濃度，或選擇更合適的mix試劑盒。

4、模板有基因組的污染：RNA提取過程中避免基因組DNA的引入，或通過引物設(shè)計(jì)避免非特異擴(kuò)增。

四、擴(kuò)增效率低

1、反應(yīng)試劑中部分成分特別是熒光染料降解。

2、反應(yīng)條件不夠優(yōu)化：可適當(dāng)降低退火溫度或改為三步擴(kuò)增法。

3、反應(yīng)體系中有PCR反應(yīng)抑制物：一般是加入模板時(shí)所引入，應(yīng)先把模板適度稀釋，再加入反應(yīng)體系中，減少抑制物的影響。

測試狗文庫百科

上一篇：干貨滿滿！「模擬計(jì)算干貨」匯總大放送，你想要的都在這里~

下一篇：實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測技術(shù)在生物學(xué)的用途

相關(guān)文章

BET氣體吸附原理及其技術(shù)發(fā)展

2025-02-21

熱重分析（TG-DTG）曲線的幾種解析方法

2023-12-26

一文詳解掃描電子顯微鏡(SEM)的工作原理及應(yīng)用技術(shù)

2023-10-08

一文詳細(xì)介紹he染色的基本原理、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

2023-11-23

接觸角測試（CA）的原理、樣品制備要求及實(shí)際應(yīng)用

2023-11-16

恒電流間歇滴定法GITT的基本原理以及測試教程

2022-08-12

熱門文章/popular

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

手把手教你用ChemDraw 畫化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

電化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之電化學(xué)工作站篇（二）三電極和兩電極體系的搭建和測試

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章

感谢您访问我们的网站，您可能还对以下资源感兴趣：

日韩av老熟女-久久播亚洲视频-国产精品久久久系列-日韩激情96久久-欧美亚洲熟女另类-久久人妻诱惑我-久久高清黄又色视频-日韩av中文字幕网站-日韩人妻精品中文字幕,日韩成人在线不卡av,国产精品一香蕉av,婷婷久久综合久久久 WmOrt

日韩av老熟女-久久播亚洲视频-国产精品久久久系列-日韩激情96久久-欧美亚洲熟女另类-久久人妻诱惑我-久久高清黄又色视频-日韩av中文字幕网站-日韩人妻精品中文字幕日韩av老熟女-久久播亚洲视频-国产精品久久久系列-日韩激情96久久-欧美亚洲熟女另类-久久人妻诱惑我-久久高清黄又色视频-日韩av中文字幕网站-日韩人妻精品中文字幕日韩av老熟女-久久播亚洲视频-国产精品久久久系列-日韩激情96久久-欧美亚洲熟女另类-久久人妻诱惑我-久久高清黄又色视频-日韩av中文字幕网站-日韩人妻精品中文字幕