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石蠟切片技術里常用的染色法——HE染色

來源：時間：2024-11-07 10:14:41 瀏覽：6080次

石蠟切片技術里常用的染色法——HE染色

石蠟切片技術是一種廣泛應用于病理學、生物學等領域的制片技術，通過對生物組織進行固定、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、貼片、烤片等一系列處理，制備出可供顯微鏡觀察的薄切片；在石蠟切片的觀察中，染色是至關重要的一步，它可以使組織結構更加清晰，便于研究人員進行觀察和分析；HE染色，即蘇木精-伊紅染色，是石蠟切片技術中最常用的染色方法之一。

一、原理

HE染色利用蘇木精（Hematoxylin）和伊紅（Eosin）兩種染料的親和力不同，對細胞的不同成分進行著色；蘇木精是一種堿性染料，能夠與細胞核中的酸性物質（如核酸）結合，使細胞核呈藍色或紫色；伊紅是一種酸性染料，能夠與細胞質中的堿性物質（如蛋白質）結合，使細胞質呈紅色或粉紅色。

二、步驟

1.脫蠟：將石蠟切片放入二甲苯中，去除切片上的石蠟，使其透明。

2.梯度酒精脫水：將脫蠟后的切片依次放入高濃度到低濃度的酒精中，以去除二甲苯，使切片適應水環(huán)境。

3.水洗：用蒸餾水清洗切片，去除殘留的酒精。

4.蘇木精染色：將切片放入蘇木精染液中，通常在室溫下染色5-10分鐘。

5.水洗：用蒸餾水清洗切片，去除多余的蘇木精染液。

6.分化：將切片放入1%的鹽酸酒精中分化，直至細胞核顏色清晰，背景幾乎無色。

7.水洗：再次用蒸餾水清洗切片，停止分化。

8.返藍：將切片放入弱堿性溶液中（如碳酸鋰溶液），使細胞核顏色更加鮮艷。

9.伊紅染色：將切片放入伊紅染液中，通常染色1-3分鐘。

10.水洗：用蒸餾水清洗切片，去除多余的伊紅染液。

11.梯度酒精脫水：將切片依次放入低濃度到高濃度的酒精中，去除水分。

12.透明：將脫水后的切片放入二甲苯中，使其透明。

13.封片：用中性樹膠或加拿大樹膠封片，覆蓋玻片。

三、注意事項

1.染液濃度和染色時間：染液濃度和染色時間需要根據(jù)組織類型和切片厚度進行調整，以達到最佳染色效果。

2.分化時間：分化時間不宜過長，以免過度分化導致細胞核顏色過淡或消失。

3.返藍時間：返藍時間不宜過長，以免細胞質著色受到影響。

4.切片脫水：在梯度酒精脫水過程中，應確保切片完全脫水，以免影響透明和封片。

5.封片：封片時，應避免氣泡的產(chǎn)生，確保切片與蓋玻片之間無空氣。

四、應用

HE染色因其簡單、快速、結果可靠等特點，被廣泛應用于病理學診斷、生物學研究等領域；通過HE染色，可以清晰地觀察到細胞核和細胞質的形態(tài)結構，對于判斷組織的正常與否、病變性質和程度具有重要意義。

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