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微觀偵探：ELISA酶聯(lián)免疫吸附測試

來源：時間：2024-05-20 10:01:19 瀏覽：2304次

微觀偵探：ELISA酶聯(lián)免疫吸附測試

ELISA酶聯(lián)免疫吸附測試（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一種用于檢測和定量蛋白質(zhì)、肽、抗原、抗體等生物分子的免疫學(xué)分析方法；作為一種高靈敏度、高特異性的檢測技術(shù)，ELISA在生物科研、臨床診斷、疾病監(jiān)測、疫苗研發(fā)等領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用。

一、原理

ELISA技術(shù)基于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合反應(yīng)。

在ELISA實驗中，待檢測的生物分子（抗原）首先與固相載體上的抗體結(jié)合，然后加入酶標(biāo)記的二抗，最后通過添加底物并測量酶促反應(yīng)的產(chǎn)物生成量，從而間接反映出待檢測生物分子的含量。

二、分類

根據(jù)檢測目標(biāo)物的不同，ELISA技術(shù)可分為以下幾種類型：

1. 直接ELISA：待檢測抗原與固相抗體直接結(jié)合，然后加入酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測。

2. 間接ELISA：先將待檢測抗原與固相抗體結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的抗體進(jìn)行檢測。

3. 競爭ELISA：待檢測抗原與酶標(biāo)記抗體競爭性地與固相抗體結(jié)合，通過測量酶標(biāo)記抗體與固相抗體的結(jié)合量來反映待檢測抗原的含量。

4. 夾心ELISA：利用兩種不同抗原決定簇的抗體分別固定在固相載體和酶標(biāo)記載體上，待檢測抗原位于兩者之間，形成“夾心”結(jié)構(gòu)，通過測量酶標(biāo)記抗體與固相抗體的結(jié)合量來反映待檢測抗原的含量。

三、步驟

1. 包被：將抗體或抗原固定在固相載體（如微孔板）上。

2. 洗滌：去除未結(jié)合的游離分子。

3. 加樣：加入待檢測樣品，使抗原與抗體在固相載體上結(jié)合。

4. 洗滌：去除未結(jié)合的游離分子。

5. 加酶標(biāo)記二抗：加入酶標(biāo)記的二抗，與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體結(jié)合。

6. 洗滌：去除未結(jié)合的游離分子。

7. 加底物：加入底物，酶標(biāo)記二抗催化底物生成產(chǎn)物。

8. 終止反應(yīng)：加入終止劑，終止酶促反應(yīng)。

9. 測量：通過酶標(biāo)儀測量產(chǎn)物生成量，從而間接反映待檢測生物分子的含量。

四、應(yīng)用

1. 生物科研：ELISA技術(shù)在生物科研領(lǐng)域中發(fā)揮著重要作用，可用于檢測蛋白質(zhì)、肽、抗原、抗體等生物分子，為研究生物體內(nèi)的生物過程提供有力支持。

2. 臨床診斷：ELISA技術(shù)在臨床診斷中具有廣泛應(yīng)用，如病毒感染、細(xì)菌感染、自身免疫性疾病、腫瘤標(biāo)志物等檢測。

3. 疾病監(jiān)測：ELISA技術(shù)可用于疾病監(jiān)測，如傳染病、慢性病等，為及時發(fā)現(xiàn)和控制疾病提供重要手段。

4. 疫苗研發(fā)：ELISA技術(shù)在疫苗研發(fā)中具有重要意義，可用于檢測疫苗抗原、評估疫苗免疫效果等。

5. 食品安全：ELISA技術(shù)在食品安全領(lǐng)域也有應(yīng)用，如檢測食品中的有害物質(zhì)、病原體等。

五、優(yōu)缺點

1. 優(yōu)點：高靈敏度、高特異性、操作簡便、易于自動化、適用于多種樣品類型。

2. 缺點：對樣品制備和操作要求較高、可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果、成本相對較高。

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