日韩av老熟女-久久播亚洲视频-国产精品久久久系列-日韩激情96久久-欧美亚洲熟女另类-久久人妻诱惑我-久久高清黄又色视频-日韩av中文字幕网站-日韩人妻精品中文字幕,日韩成人在线不卡av,国产精品一香蕉av,婷婷久久综合久久久

預(yù)存
Document
當(dāng)前位置：文庫(kù)百科 ? 文章詳情
測(cè)試表征系列丨一文詳解MTT法和CCK－8法測(cè)定細(xì)胞毒性和增殖的優(yōu)劣
來(lái)源：科學(xué)10分鐘 時(shí)間：2021-07-01 14:38:03 瀏覽：28176次

MTT法檢測(cè)

MTT法又稱(chēng)MTT比色法，是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲臜，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀在570nm波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測(cè)、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。

CCK-8法檢測(cè)

CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一種基于WST-8（水溶性四唑鹽，一種類(lèi)似于MTT的化合物）的細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)試劑盒，用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)。在電子耦合試劑存在的情況下，WST被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成橙黃色的水溶性的甲臜染料（formazan），甲臜染料直接溶解在培養(yǎng)基中。細(xì)胞若增殖越多越快，則培養(yǎng)基的顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，生成甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。應(yīng)用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值（450nm）并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算便可以獲得細(xì)胞毒性相關(guān)數(shù)據(jù)。

CCK-8與MTT比較

（1） CCK-8 試劑盒提供了一種靈敏度高， 操作簡(jiǎn)便， 使用安全， 重現(xiàn)性好的細(xì)胞增殖與活性檢測(cè)方法。與傳統(tǒng)的MTT相比， 無(wú)需有機(jī)溶劑和放射性同位素， 步驟少， 無(wú)損失， 結(jié)果準(zhǔn)確！

（2）MTT 實(shí)驗(yàn)生成的甲瓚不是水溶性的， 需要使用 DMSO 等有機(jī)溶劑溶解后才能檢測(cè)； 而CCK-8法產(chǎn)生的甲瓚是水溶性的，不僅省去了溶解的步驟， 更因此而減少了該操作步驟帶來(lái)的誤差。

（3）與 MTT 方法相比， CCK-8法線性范圍更寬， 靈敏度更高。

（4）CCK-8法對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性， 可以多次測(cè)定， 選取最佳測(cè)定時(shí)間。且CCK8法所用試劑在培養(yǎng)基中比 MTT 更加穩(wěn)定， 實(shí)驗(yàn)效果重復(fù)性好。

（5）MTT 具有毒性， 同時(shí)其生成的甲瓚需要有機(jī)溶劑溶解，溶解甲瓚的有機(jī)溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)者也有損害，會(huì)對(duì)操作人員身體造成毒害，WST-8無(wú)毒， 使用中無(wú)需有機(jī)溶劑， 操作更加安全。

（6）CCK-8試劑盒在 4℃避光可長(zhǎng)期保存， 使用無(wú)需配制， 即開(kāi)即用。MTT一般最好現(xiàn)用現(xiàn)配，過(guò)濾后4℃避光保存兩周內(nèi)有效。

CCK-8試劑使用方法

一、 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）

1、 先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。

2、 按比例(例如:1/2 比例)依次用培養(yǎng)基等比稀釋成細(xì)胞濃度梯度，一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。

3、 接種后培養(yǎng)2-4小時(shí)使細(xì)胞貼壁，然后加 CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD值， 制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸)，OD值為縱坐標(biāo) (Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(適用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間要一致)。

二、 細(xì)胞活性檢測(cè)

1、 在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37 °C， 5% CO2）。

2、 向每孔加入 10 μL 的CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù)）。

3、 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。

4、 用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450nm 處的吸光度。

5、 如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 μL 0.1M 的 HCL 溶液或者 1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

三、 細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)

使用方法（以96孔板為例，其他規(guī)格培養(yǎng)板按實(shí)際情況安排） ：

1、 在96孔板中配制100μl的細(xì)胞懸液（通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100μl 2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔100μl 5000個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度等因素決定）。按照實(shí)驗(yàn)需要，進(jìn)行培養(yǎng)（在 37 °C，5%CO2的條件下）預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)。

2、 向培養(yǎng)板加入1-10μl不同濃度的待測(cè)藥物刺激。

3、 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)） 。

4、 每孔加入10μl CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)） 。如果起始的培養(yǎng)體積為200μl，則需加入20μl CCK-8溶液，其他情況以此類(lèi)推?？梢杂眉恿讼鄳?yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和 CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作空白對(duì)照。如果擔(dān)心所使用的藥物會(huì)干擾檢測(cè)，則需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒(méi)有加入細(xì)胞的孔作為空白對(duì)照。

5、 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育1-4小時(shí)，對(duì)于大多數(shù)情況，孵育 1 小時(shí)即可。時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，初次實(shí)驗(yàn)時(shí)可以在 0.5、1、2 和4小時(shí)候分別用酶標(biāo)儀檢測(cè)，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個(gè)時(shí)間點(diǎn)用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

6、 用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度，如無(wú)450nm濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片?？梢允褂么笥?00nm的波長(zhǎng)， 例如650nm，作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。

7、 如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10μl 0.1M 的 HCL溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。

8、 注意：如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收可。

活力計(jì)算：

細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0 加藥） -A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和 CCK-8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度

*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

注意事項(xiàng)：

1、 使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意培養(yǎng)基蒸發(fā)：一方面，由于 96 孔板周?chē)蝗ψ钊菀渍舭l(fā)，可以采取棄用周?chē)蝗Φ霓k法，改加 PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

2、 CCK-8 檢測(cè)細(xì)胞活性的原理是通過(guò)檢測(cè)活細(xì)胞脫氫酶催化的反應(yīng)。任何待測(cè)體系中存在還原劑，例如一些抗氧化劑會(huì)干擾檢測(cè)，需設(shè)法去除。

3、 建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。

4、 建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。加入CCK-8試劑時(shí)，建議斜貼著培養(yǎng)板壁加，不要插到培養(yǎng)基液面下加樣，溶液產(chǎn)生氣泡，會(huì)干擾OD值讀數(shù)。

5、 當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn) 96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1000個(gè)/孔（100μl 培養(yǎng)基）。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于 2500 個(gè)/孔（100μl 培養(yǎng)基） ，且培養(yǎng)時(shí)間可適當(dāng)延長(zhǎng)。如果要使用 24 孔板或 6 孔板實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

6、 加入CCK-8溶液時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，培養(yǎng)基顏色已變化或 PH 值變化，建議換用新鮮的培養(yǎng)基。

7、 如果沒(méi)有 450nm 的濾光片，可以使用吸光度在 430-490nm 之間的濾光片，但是 450nm 濾光片的檢測(cè)靈敏度最高。

8、 酚紅和血清對(duì)本試劑盒的測(cè)定無(wú)明顯影響。培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。

9、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

做細(xì)胞毒性/增殖測(cè)試，就找測(cè)試狗

技術(shù)顧問(wèn)劉老師：19113235271（微同）

送樣須知：您只需提供待測(cè)樣品（濃度指定）、實(shí)驗(yàn)方案和具體要求 ，其他所涉及的細(xì)胞、試劑盒以及生物耗材等實(shí)驗(yàn)室均可聯(lián)系提供，歡迎下單。

最近找測(cè)試狗做抗菌測(cè)試

還有優(yōu)惠哦~



推薦閱讀

? 測(cè)試表征系列 | 一文詳解異質(zhì)結(jié)的制備與表征（附PDF課件）

? 測(cè)試表征系列 | 激光掃描共聚焦顯微鏡的基本原理與應(yīng)用

? 測(cè)試表征系列 | 穆斯堡爾譜的基本原理與應(yīng)用（附PDF課件）


評(píng)論 / 文明上網(wǎng)理性發(fā)言
12條評(píng)論
全部評(píng)論 / 我的評(píng)論
最熱 /  最新
全部 3小時(shí)前 四川
文字是人類(lèi)用符號(hào)記錄表達(dá)信息以傳之久遠(yuǎn)的方式和工具?，F(xiàn)代文字大多是記錄語(yǔ)言的工具。人類(lèi)往往先有口頭的語(yǔ)言后產(chǎn)生書(shū)面文字，很多小語(yǔ)種，有語(yǔ)言但沒(méi)有文字。文字的不同體現(xiàn)了國(guó)家和民族的書(shū)面表達(dá)的方式和思維不同。文字使人類(lèi)進(jìn)入有歷史記錄的文明社會(huì)。
點(diǎn)贊12
回復(fù)
全部
查看更多評(píng)論
相關(guān)文章

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

2020-05-03

手把手教你用ChemDraw 畫(huà)化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

2021-06-19

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

2021-01-22

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

2019-10-25

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

2019-10-25

XRD的基本原理與應(yīng)用

2020-11-03

項(xiàng)目推薦/Project
細(xì)胞毒性/增殖

細(xì)胞毒性/增殖

熱門(mén)文章/popular

基礎(chǔ)理論丨一文了解XPS（概念、定性定量分析、分析方法、譜線結(jié)構(gòu)）

手把手教你用ChemDraw 畫(huà)化學(xué)結(jié)構(gòu)式：基礎(chǔ)篇

晶體結(jié)構(gòu)可視化軟件 VESTA使用教程（下篇）

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（上）

電化學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)之電化學(xué)工作站篇 （二）三電極和兩電極體系的搭建 和測(cè)試

【科研干貨】電化學(xué)表征：循環(huán)伏安法詳解（下）

微信掃碼分享文章
又粗又长又大又粗又硬毛片大香蕉-欧美黄视频-gogogo高清在线观看免费播放电视剧-一道本视频在线观看 | 亚洲av无码男人的天堂在线-强行中出丝袜熟女人妻-欧美精品亚洲精品日韩专区-日韩中出网 无码人妻AⅤ一区二区三区A片一 | 小伙操熟妇-日韩8x8x网站-4438xxxxxAV-www.最新地址伊人 | 熟女自慰400部-黑人干日本-国产无码aaa级黄片-美女聊天室 | 久违蜜臀88av-亚洲欧美一区二区在线观看-大香蕉之男人的天堂-猛男操美女 | 五十路女人电影-天美骚妇视频-气质熟女人妻91Porn-九色PORNY原创自拍 | 国产一区二区高清-淫荡骚穴-精品国产一区二区三区久久狼黑人-1080日本电影免费 8164 9628 小蛮腰 网页无法访问 | 亚洲卡5卡6卡7卡2021入口-羞耻的喂奶playH1v1青梅-大奶少妇做爱-久久婷婷人人澡人人喊人人爽 | 91偷拍与自偷拍精品无码-妃光莉无码中文字幕在线-gogogo手机高清在观看-欧美日韩黄色电影在线播放 | 桃色不卡-黄色AV美女网站-激情欧美一区二区免费视频-人人妻人人乐人人 | 北岛玲五十路丰满人妻-干屄视频在线观看-97淫荡人妻无码视频-四虎色片 | 熟女综合区图片-偷拍第14页-干mm色啊视频-老师日批视频 | 97碰撞这里只有精品-无码 有码 日韩 人妻日韩无码免费-欧美日韩精品久久久免费观看-dss少妇PiCs粉嫩BB | 2021亚洲国产精品无码-北条麻妃五十路-国产美女裸体无遮挡多久免费视频-免费追剧在线观看 久久91精品国产一区二区 | 美女裸网站国产-颤抖到了绝顶高潮合集-XXXXX潢色-国产老太婆乱子伦农村 | 超清最新电影在线观看 蜻蜓点水服务是指什么意思-日日爱爱视频-亚洲Aⅴ日韩无码黄片-风间由美777久久久精品 | 午夜视频在线观看www中文-快看黄色三级片中文版国产-就去干成人网-台湾性XXXXXXX97 | 四虎影成人精品A片-好男人影视一区二区-free性饿老太XXHD-艳星与黑人巨大videos | 国产精品iGAO视频网入口-欧美射一夜6699-4K岛国HEYZO无码精品-伊人影院2019 | 北条麻妃成人-五十路老熟女码A片-大黄操逼网站-亚洲欧美综合国产精品一区 | 黑人玩弄人妻1～12-一区二区三区四区中文字幕在线观看-剧情片全集免费播放 第一种无激情码激情 HD电影在线观看 -日韩啪啪视频 吹潮喷水白浆在线播放-亚洲美女插-99久久精品视香蕉蕉-黑人60厘米巨大全进入 | 熟女人妻去干网-骚色妞干网免费视频-情色视屏-两男一女做爱视频在线观看 | 午夜一级剧厂-久热天色五月四虎-黄色人人插-熟女一二三王 | 国模沟沟小穴-中国女人XX视频-国产欧美日本亚洲精品一4区-北条麻妃被躁30分钟视频 | 四十路 素人 美熟女 中出-偷拍九九视频精品免费-伊人第七色-亚洲人Jizzy日本jiz人 | 超碰1997-一本之道高清视频在线观看-亚洲精品手机在线观看电影-蜜美杏AV无码破解在线 | 一区二区免费在线观看-竹内纱里奈东京热no338-大学生国语传媒激情电影院-2012人妻在线视频影院 | 黄色TV-10款成品短视频app下载安装-在线播放人妻秘书被上司干-大地资源三中文免费第三页 | 在线亚洲97se亚洲综合在线-熟女高跟捆绑-久久早日韩视频-久久一次到欧美 | 亚洲精品久久国产高清情趣-婷婷窝窝色比比资源-欧美宗合网-黑人干亚洲女 | jizzjizzjizz护士高潮-欧美性生交XXXXX-gogogo免费手机高清在线 日韩高清A片-PGD-736誘惑女教师痴女在线观看 | 亚洲综合激情另类小说区-美女自慰一级片-极品人妖tubeHD汇编-男女国产操 | 国产xxx video-晚上必备在线观看视频日本人妖精视频-极品身材的亲姐内射黄片-亚洲国产午夜网站在线 | 驲屄影视大全-美女私人爱爱-人妻你懂的-精品一区二区三区免费 | 免费公开在线自慰97-国产高潮失禁喷水爽到抽搐-美女扒开粉嫩尿口-试看120秒又黄又大视频 | 在线看成年人玩bb-欧美亚洲色图小说-JJIZZ女人多水喷水在线观看-一本之道av | 欧美一级黑人-中国熟妇4567-操东北女人的视频-秋霞A级片 | 插逼综合-91丨九色丨老熟女富婆-jizzjizz日本jizzjizz和黑人-日本人牲交BBBXXXX | 久久99久久99精品免观看-HD动漫在线观看 国产亚洲免费观看-人妻黑人一区二区三区-做受 高潮喷水片在线观看 | 美女跨下黑森林视频网站-最近2019中文字幕第二页视频-黑人的香蕉进去白人的蜜桃网站-麻麻趴跪着掀裙子黑人调教 | 搡老熟女国产另类-自慰喷潮在线观看-四虎884,aa,成人精品-昭和熟女五十路冢本 |
+

你好，很高興為您服務(wù)！

發(fā)送